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    商品貨號:MA0218
    CAS 號:V
    英文名字:Cell Counting Kit-8
    質量標準:Meilunbio
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    商品信息

    質檢證書(coa)

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    產品描述

    Cell Counting Kit-8(簡稱CCK-8),是一種基于WST-8而廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速、高靈敏度檢測的試劑盒。
    CCK-8試劑中含有WST-8(化學名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽)是一種類似于MTT的化合物,它在電子耦合試劑1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)存在條件下,可以被線粒體內的脫氫酶還原為具有高度水溶性的橙黃色甲瓚產物Formazan (參考圖1),生成的Formazan數量與活細胞的數量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析,細胞增殖越多越快,則顏色越深;細胞毒性越大,則顏色越淺。

     

    圖1. WST-8檢測原理圖 (EC=electron coupling reagent,即電子耦合試劑)


    WST-8與以往的增殖/毒性測定試劑相比,具有明顯優點(參考表1)。美侖CCK-8試劑盒具有靈敏度高、反應時間短、線性范圍寬、數據可靠、重現性好等特點,可以廣泛應用于藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗。

    1. 增殖/毒性測定試劑的比較

    檢測方法

    MTT法

    XTT法

    WST-1法

    CCK-8法

    甲瓚產物的水溶性

    差(需加有機溶劑溶解)

    檢測靈敏度

    很高

    很高

    最高

    檢測時間

    較長

    較短

    較短

    最短

    檢測波長

    560-600nm

    420-480nm

    420-480nm

    430-490nm

    細胞毒性

    高,細胞形態完全消失

    很低,細胞形態不變

    很低,細胞形態不變

    很低,細胞形態不變

    試劑穩定性

    一般

    較差

    一般

    很好

    批量樣品檢測

    可以

    非常適合

    非常適合

    非常適合

    便捷程度

    一般

    便捷

    便捷

    非常便捷

    產品優勢 
    • 靈敏度高,線性范圍寬,數據可靠,重現性好
    • 操作簡便,省時省力
    • 水溶性,不需要換液,尤其適合于懸浮細胞
    • 無需放射性同位素和有機溶劑,對細胞毒性低
    • 為1瓶溶液,毋需預制,即開即用
    • 適合于高通量藥物篩選
    • 檢測效果與國外品牌相媲美

     

    真實數據對照

    一:溶液外觀:

    如圖1所示,粉紅色,真正做到和進口一致

     

    二:產品的毒性實驗:在相同條件下,用含有10% CCK-8的培養基和不含CCK-8的培養基同時在六孔板中培養細胞,一天后鏡檢觀察細胞狀態。 

    鏡檢結果:如圖2所示,用含有CCK-8的培養基培養的條件下,細胞狀態幾乎沒有影響,細胞毒性極小。

     

    2. 使用美侖CCK-8對細胞狀態的影響

     

    三:加速穩定性實驗:將美侖CCK-8試劑在40℃放置3小時后,再與正常儲存的美侖CCK-8同時檢測細胞活力,比較差異。

    檢測結果:如圖3所示,40℃放置3小時后,檢測效果并無顯著性變化,穩定性良好。

     

    四:對照實驗:采用某進口品牌CCK-8試劑盒作為對照,在相同的實驗條件下,檢測細胞的活力。

    檢測結果:如圖4所示,美侖細胞增殖及毒性檢測試劑盒(CCK-8)測得的吸光值/細胞數目比值更大,靈敏度更高,與某國外品牌CCK-8試劑盒相比實驗差異小,幾乎相當于不同批次之間的差異,數據穩定可靠。

    實驗數據:

    圖4,使用美侖CCK-8與其他進口品牌CCK-8檢測細胞活力的比較

    保存條件

    4℃避光保存,一年有效。-20℃可以儲藏兩年,但反復凍融會增加背景值,干擾實驗測定,因此請將經常使用的試劑保存在4 ℃。
     

    操作方法

    請參考說明書。
     

    注意事項
    • 建議先做幾個孔摸索接種細胞的數量和加入CCK-8試劑后的培養時間。
    •  CCK-8 反應時間的確定:一般情況下,白細胞顯色比較困難,因此需要增加細胞數量和延長 CCK-8 反應時間。懸浮細胞與貼壁細胞相比較難顯色,因此懸浮細胞在加入 CCK-8 培養0.5-4小時后,可先從培養箱取出,目測或用酶標儀測定顯色程度,若顯色困難可以繼續培養數小時后再確定。對于貼壁細胞,CCK-8 的培養時間一般為 0.5-4 小時,在培養 20 分鐘左右即可取出肉眼觀察顯色程度。
    • 每孔接種細胞數:當使用標準96孔板時,貼壁細胞的最小接種量至少為1000個/孔 (100 μl培養基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低,因此推薦接種量不低于2500個/孔 (100 μl培養基)。如果要使用24孔板或6孔板實驗,請先計算每孔相應的接種量,并按照每孔培養基總體積的10%加入CCK-8溶液。
    • 設定空白對照:在不含細胞的培養基中加入CCK-8,培養一定的時間,測定450 nm的吸光度即為空白對照。在做加藥實驗(細胞毒性實驗)時,還應考慮藥物的吸收,可在加入藥物的培養基中加入CCK-8,培養一定的時間,測定450 nm的吸光度作為空白對照。
    • 影響CCK-8測定的物質:由于CCK-8檢測細胞活性的原理是通過檢測活細胞脫氫酶催化的反應,所以如果待測體系中存在氧化還原物質則可能會干擾檢測結果,還原性物質會使吸光度增加,氧化性物質會使吸光度減小,因此應需設法去除這些物質的影響。酚紅和血清對本試劑盒的測定無明顯影響,培養基中酚紅的吸光度可以在計算時,通過扣除只含有培養基的對照孔中本底吸光度而消除,因此不會對檢測結果造成影響。
    • 測定波長:如果樣品為高渾濁度的細胞懸液,建議采用雙波長進行測定,檢測波長450nm,參比波長600-650nm。如果沒有450nm的濾光片,可以使用吸光度在430-490nm之間的濾光片,但是450nm檢測靈敏度最高。
    • 當在培養箱內培養時,培養板最外一圈的孔最容易干燥揮發,由于體積不準確而增加誤差。一般情況下,最外一圈的孔只加培養基,不作為測定孔用。
    • 如果細胞培養時間較長,培養基顏色發生變化,應洗滌細胞更換培養基后再加CCK-8檢測。
    • 為了您的安全和健康,操作時請穿著實驗服并佩戴一次性手套。

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